一、样品或色谱柱污染：

新柱子刚开始使用时没有出现问题，在使用一段时间后就会出现数个色谱峰重叠在一起形成多个分叉，这时可以尝试用流动相冲洗柱子，冲洗时间宜慢不宜快。如果排除是柱子问题，则要查看样品有没有被污染等，或者混入了别的药物组分也会造成分叉的现象。

二、溶剂效应：

    在反相液相色谱中，如使用100%有机溶剂或强溶剂大体积进样时，将使分析物过早被洗脱出色谱柱，导致峰变形。如需解决这个问题可以对分析物进行蒸发浓缩，使进样体积减少。或者将进样溶剂改为用流动相稀释，即使进样体积较大也不会出现峰变形的情况。较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾。这时可以改变流动相的比例，提高水相可以延缓出峰时间来解决问题。

三、色谱柱过载

   当进样量超过柱子的容量时,样品峰会呈现分叉或拖尾,解决方案就是减少进样量。这种问题一般在使用小体积色谱柱是表现更为明显，所以色谱柱方法从常规250mm或150mm长色谱柱转化到体积较小的快速分析柱时，进样量要按照柱体积的减小的比例而减小。

四、色谱柱塌陷

    柱塌陷也会引起峰的分叉，是很难修复的。如果流动相pl>7或在色谱柱pH耐受范围临界点附近长时间使用，是比较容易造成硅胶填料溶解塌陷，会看到色谱图的每个峰型都会发生变化，如峰拖尾，加宽或分叉。这时最好的方法就是更换色谱柱了。在日常使用的过程中需要注意将温度降低到40℃以下，特别是使用高pH流动相时，使用高温兼容色谱柱，如立体保护的硅胶柱、混合型柱、聚合物柱、氧化锆柱等。使用特别适合在较高pH下操作的高覆盖率或双交联固定相（比如，ZORBAX Extend-C18），或使用聚合物、混合型或氧化锆反相柱。

五、接头连接不正确

   如果色谱柱在使用过程中发现每个峰的峰形都出现问题,先考察是否有连接问题。管线可能太长或太短——这种情况可能导致渗漏或峰分叉、拖尾。如果管线太长，密封圈位置不当，将发生渗漏。如果管线推出的距离不够，将会产生一段死空间，形成混合腔，导致柱外体积，使峰形变坏。如果您使用的是不同厂商的色谱柱,一定要确保使用正确的接头,并保证色谱柱末端接头位置正确。  

六、色谱柱性能下降

    在使用色谱柱时，会用其分析各种各样的目标物、使用各种流动相并分离不同的样品基质，经过长时间的使用，色谱柱会受到这些物质的影响发生一些微小的变化，从而引起峰分叉、拖尾或保留时间的改变。在使用新色谱柱时应该保留其初次测试样品的色谱图尤为重要，使用一段时间后进行比较就能发现性能上的变化。如果分离度下降导致不能进行良好定量，这时色谱柱就应该更换新的了。

七、柱前筛板部分堵塞

　　样品的前处理很重要，如血浆样品，如果没有提前处理好，在长期分析时，没有保护柱或在线柱前过滤器，那么颗粒物和强吸附物很可能在柱入口筛板发生堵塞，同时会伴随压力升高。解决办法是进行色谱柱反冲，但色谱柱反冲也需谨慎，1.8um粒径的色谱柱尽量避免反冲。反冲时首先把连接液相的那端拆开，然后把过滤器取出来用超声洗干净或者用流动相缓慢冲洗柱子。

   由于现在使用的是高效装柱工艺，不建议更换色谱柱入口筛板，在许多色谱柱上也不可能更换。如果更换筛板，可能会影响柱效。所以最好在色谱柱前安装在线过滤器和保护柱。